【AASLD2022速遞】整合HBV DNA相關研究進展

編者按：第73屆美國肝病研究學會年會（AASLD2022）于當地時間2022年11月4日-8日在美國召開。

隨著慢乙肝臨床治愈研究的深入，目前對整合HBV的研究逐步增多，以探討更多的生物學意義和臨床應用。本次AASLD2022大會上，公布了多篇整合HBVDNA相關研究，肝霖君整理相關報告的數據與大家分享。

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33 在慢乙肝自然史中均可檢測到整合HBVDNA，獲得HBsAg清除后整合程度明顯降低

研究背景

在慢乙肝自然史中，還沒有很好地定義HBV整合程度的譜系。因此，中國香港大學李嘉誠醫學院袁孟峰教授團隊研究了處于不同免疫分期的慢乙肝患者和隱匿性HBV感染患者的HBVDNA整合情況。

研究方法

本研究共納入53例處于不同免疫分期的中國初治慢乙肝患者（男28例，女25例），分別為HBeAg陽性感染期（EPI;n=3），HBeAg陽性肝炎期（EPH;n=11），HBeAg陰性感染期（ENI;n=7），HBeAg陰性肝炎期（ENH;n=12）以及HBsAg陰性期（SN;n=20）。SN組分為2個亞組：有HBsAg清除記錄的SN患者（Sloss;n=10）和既往無HBsAg記錄且可檢測到HBVDNA的SN患者（NAT+;n=10）。所有患者進行配對測序和HBV整合的識別。

研究結果

每位患者的平均rawreads為1450萬次。所有患者均可檢測到HBV整合，共計97824個可檢測的整合事件（Int）。各組中位Int分別為：EPI組905個，EPH組5957個，ENI組407個，ENH組520個，Sloss組26個，NAT+組15個。處于EPI/H分期患者的中位Int顯著大于ENI/H分期（5939vs.419,p<0.0001）。感染期和肝炎期的中位Int無顯著差異（EPIvs.EPH，ENIvs.ENH,p均>0.05）。HBsAg陰性（SN）患者的中位Int顯著低于HBsAg陽性（SP）患者（23vs.937,p<0.0001）。Sloss組和NAT+組的中位Int相似（p=0.130）。

在HBsAg陽性患者中，Int與血清HBVDNA（r=0.43,p=0.012），HBsAg（r=0.68,p=0.005），ALT（r=0.35,p=0.043），肝內HBVDNA（r=62,p<0.001）和cccDNA（r=0.56,p=0.001）呈正相關；與年齡呈負相關（r=-0.46,p=0.007）；與HBcrAg無相關性。

在HBsAg陰性患者中，Int與ALT（r=0.44,p=0.053）和肝內HBVDNA（r=0.43,p=0.057）呈正相關；但與血清HBVDNA、HBsAg、cccDNA及年齡無關。

不同慢乙肝免疫分期患者的臨床特征及檢測到的HBV整合數

研究結論

所有慢乙肝患者均檢測到整合HBVDNA。在慢乙肝自然史中，HBV整合程度各不相同，從HBeAg陽性期轉換到HBeAg陰性期及HBsAg清除期時，其整合程度逐漸降低，也可能與患者發生肝癌的風險有關。

37 轉錄活化的整合HBV是臨床治愈慢乙肝患者肝內殘留HBsAg的主要來源，并可能導致HBsAg血清學逆轉

研究背景

臨床治愈患者肝內HBV標志物的特征尚不明確。因此，中山大學附屬第三醫院高志良教授團隊研究了臨床治愈時肝內HBV標記物譜系，并探討了整合HBV在產生肝內殘留HBsAg及導致HBsAg逆轉方面的潛在作用。

研究方法

肝組織分別來源于臨床治愈慢乙肝患者（n=52）、未臨床治愈的HBeAg陰性慢乙肝患者（n=21）和未治療的HBeAg陰性慢乙肝患者（n=14）。臨床治愈患者接受聚乙二醇干擾素α（PEGIFNα）和/或核苷類似物（NA）治療，獲得了血清HBsAg清除，且HBVDNA檢測不到。未臨床治愈的慢乙肝患者接受基于PEGIFNα的治療但未能實現HBsAg清除。

采用定量PCR檢測肝內共價閉合環狀DNA（cccDNA）和肝內HBVRNA水平，并在肝組織中進行HBsAg免疫組化以評估HBsAg陽性肝細胞占比，同時，通過HBV捕獲測序和轉錄組測序分析HBV整合。

研究結果

臨床治愈慢乙肝患者的肝內cccDNA水平和HBsAg陽性肝細胞占比顯著低于未臨床治愈和未治療的慢乙肝患者。與未臨床治愈的慢乙肝患者相比，臨床治愈患者的HBV整合及嵌合轉錄水平均有下降。然而，在臨床治愈慢乙肝患者中，有21.1%的患者的肝組織中殘留HBsAg陽性肝細胞，有7.7%的患者雖然未檢測到cccDNA但殘留有HBsAg陽性肝細胞。表明臨床治愈患者的肝內殘留HBsAg主要來源于轉錄活化的整合HBV。

值得注意的是，1例未檢測到cccDNA的臨床治愈慢乙肝患者，經證實其肝內殘留HBsAg陽性肝細胞來源于轉錄活化的整合HBVDNA。該患者復發后血清HBsAg水平較低，未檢測到HBVDNA，且在HBsAg血清學逆轉后繼續隨訪48周，未再接受抗病毒治療，患者的血清HBVRNA陰性。這提示轉錄活化的整合HBVDNA可能會導致HBsAg血清學逆轉。

研究結論

轉錄活化的整合HBV有助于肝內殘留HBsAg，并可能導致HBsAg血清學逆轉。此外，cccDNA轉錄的最佳標志物可能不是血清HBsAg，新的cccDNA轉錄復制標志物有待進一步研究。

39在HBeAg陰性慢乙肝患者中，高水平的肝內整合HBVDNA與血清定量HBsAg水平相關

研究背景

循環中的HBsAg可能來源于肝內cccDNA和整合HBVDNA，因此，臨床治愈可能取決于HBsAg的起源。本研究旨在評估未治療的HBeAg陽性和陰性慢乙肝患者肝組織中的cccDNA和整合HBVDNA與血清病毒學參數的關系，并試圖與肝內HBcAg和HBsAg免疫染色結果聯系起來。

研究方法

本研究評估了北美乙肝研究網絡（HBRN）中未經治療的HBeAg陽性和陰性慢乙肝患者的肝臟組織學。采用基因測序分析cccDNA及整合HBVDNA，并檢測血清HBVRNA、HBcrAg和qHBsAg水平。

研究結果

該研究隊列（HBeAg陽性組24例，HBeAg陰性組32例）主要是亞洲人（75%），平均年齡44歲。HBeAg陽性組中肝內cccDNA、血清HBVDNA、HBVRNA、HBcrAg和qHBsAg均較高。cccDNA與血清HBVRNA（r=0.53,p<0.001）和HBcrAg（r=0.41,p=0.002）顯著相關。HBeAg陽性組和陰性組中血清HBVDNA與HBVRNA的相關性均較強。在HBeAg陽性組中血清qHBsAg水平與血清HBVDNA或HBVRNA的相關性僅為中等，在HBeAg陰性組中相關性較弱。在HBeAg陰性患者中，整合HBVDNA水平與qHBsAg顯著相關。

與HBeAg陽性組相比，HBeAg陰性組中肝內整合HBVDNA的比例更高。

在HBeAg陽性和陰性組中，分別有88%和13%的患者的肝內HBcAg染色呈陽性，分別有96%和88%的患者呈HBsAg染色陽性，分別有57%和64%的患者可見顆粒胞質HBsAg染色，分別有78%和14%的患者可見膜性HBsAg染色。

研究結論

血清HBVRNA和HBcrAg可以反映肝內cccDNA濃度。HBeAg陰性慢乙肝患者肝組織中整合HBVDNA水平較高，且與qHBsAg顯著相關。整合HBVDNA產生的HBsAg可能是導致HBeAg陰性患者的血清HBVDNA和HBVRNA與qHBsAg和HBsAg免疫染色不一致的原因。這些發現對于設計以臨床治愈為目標的治療方案具有重要意義。

肝霖君有話說

目前針對整合HBVDNA的研究逐漸增多，這三項研究證實了整合HBV存在于整個慢乙肝自然史中，HBeAg陰性患者的整合HBVDNA的比例更高，當患者獲得HBsAg清除后其整合程度明顯降低。但是，整合HBV在轉錄水平的活化也參與了獲得臨床治愈患者的肝內殘留HBsAg的形成，尤其是在HBeAg陰性慢乙肝患者中，高水平的肝內整合HBVDNA與血清定量HBsAg水平相關，這也可能導致HBsAg逆轉。之前就有研究提出整合HBVDNA可以預測慢乙肝患者HBsAg清除（相關鏈接）。

近期高志良教授團隊的研究也發現患者獲得臨床治愈后HBV整合程度明顯降低（相關鏈接）。因此積極追求臨床治愈，追求更低水平的HBsAg（超高敏），整合HBVDNA可能會更低，可能更加接近完全治愈。

參考文獻：

[1]WongD,HoDW-H,LyuX,etal.ProfileofHBVDNAintegrationinthenaturalhistoryofchronichepatitisB.AASLD2022,Abstracts(33).

[2]GaoN,XieC,XuG,etal.TranscriptionallyactiveHBVintegrationcontributetoresidualintrahepaticHBsAginpatientswithfunctionalcure.AASLD2022,Abstracts(37).

[3]LauD,KimE,BaiC,etal.HighlevelsofintrahepaticintegratedHBVDNAthatcorrelatedwithserumquantitativeHBsAglevelinHBeAgnegativechronichepatitisB.AASLD2022,Abstracts(39).

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