CRCL：CRISPR/CAS9可使總HBVDNA降低或發生突變

目前的研究認為，慢性乙肝病毒感染之所以能夠持續存在，主要是因為缺乏有效的針對穩定HBV共價閉合環狀DNA(cccDNA)微染色體的新型治療方法。法國里昂癌癥研究中心(CancerResearchCenterofLyon，CRCL)研究人員進行了一項采用CRISPR/Cas9方法來靶向HBV基因組的研究，并研究了CRISPR/Cas9基因編輯后cccDNA的走向。

研究人員首先在表達HBV受體鈉離子牛磺膽酸共轉運多肽（NTCP）的HepG2細胞中建立了一種核糖核蛋白(RNP)遞送系統。其次，在建立感染后將核糖核蛋白(RNP)復合體進行遞送，旨在確保cccDNA的靶向性。最后，在進行CRISPR/Cas9基因編輯后研究人員對細胞內外HBV參數進行分析。使用Southern印跡分析確定cccDNA的表達，使用RNA測序以確定突變的cccDNA是否具有轉錄活性。

研究結果顯示，通過對不同的HBV特異性gRNA的篩查發現，無論是單一的還是組合的，都表明CRISPR/Cas9可以有效地影響HBV的復制。根據HBV基因組中的靶點，CRISPR/CAS9可使總HBVDNA降低或發生突變，兩者都導致病毒轉錄本的減少。

除了cccDNA數量出現輕微減少，這種減少可能是由于降解的原因導致，研究人員持續觀察到一個較小的ccccDNA片段的出現，通過PCR，Southernblot和RNA-seq分析表明該片段在轉錄上是具有活性的。

這項研究結果表明，這個“小cccDNA”是Cas9同時在兩個靶位點誘導雙鏈斷裂，然后修復大片段時產生的產物。

通過核苷類似物(NAs)抑制HBVDNA復制的中間產物后，加入核糖核蛋白(RNP)復合體出現了cccDNA水平降低，這表明cccDNA確實是CRISPR/Cas9復合物的直接靶點。

綜上所述，該項研究結果提示，用CRISPR/Cas9靶向乙型肝炎病毒會導致cccDNA的突變、裂解和修復，并且核苷類似物(NAs)和CRISPR/Cas9基因編輯兩者合用具有有效的協同作用。

值得注意的是，Cas9誘導的效應是可持續的，表明乙肝病毒基因組發生了永久性的變化。

盡管gRNAs組合可引起截斷，“小cccDNA”仍是具有轉錄活性的，并且有可能產生HBsAg。研究人員也表示，盡管看到上述結果，但仍有必要進行進一步和更長期的體內研究，以確定基因編輯的有效性和不可逆性。（更多肝病新藥研究信息敬請關注“肝臟時間”微信公眾號）！

信息來源

SAT376：TargetinghepatitisBviruswithCRISPR/Cas9approach