南開大學張曉東教授：擾素α清除cccDNA又添新機制最新研究結果

編者按：基于聚乙二醇干擾素α（PEGIFNα）的治療策略是慢乙肝患者追求臨床治愈的最佳選擇。PEGIFNα能提高慢乙肝臨床治愈率主要在于其直接抗病毒和免疫調節雙重作用。乙肝的完全治愈則需要獲得cccDNA的清除，近期有多項研究發現IFNα在清除cccDNA上的新機制，這似乎為今后乙肝完全治愈的方法探索提供了線索。

寧琴教授團隊近期揭示IFNα可通過介導細胞外泌體miRNA清除cccDNA（相關鏈接）。郭巨濤教授團隊則從表觀遺傳學方面證實IFNα可誘導募集到cccDNA微染色體上的三種蛋白來改變組蛋白翻譯后修飾，并協同抑制cccDNA轉錄（相關鏈接）。

HBVcccDNA是由組蛋白和非組蛋白組裝成的核內染色質樣cccDNA微型染色體。細胞內琥珀酰轉移酶（GCN5）被募集到cccDNA上來調控cccDNA轉錄。最近來自于南開大學的張曉東教授團隊發現干擾素α可抑制cccDNA上GCN5介導的組蛋白琥珀?；饔脧亩ㄟ^表觀遺傳調控來清除cccDNA。

表觀遺傳學是研究基因的核苷酸序列不發生改變的情況下，基因表達了可遺傳的變化的一門遺傳學分支學科。這個概念意味著即使環境因素會導致基因的表達不同，但是基因本身不會發生改變，如DNA甲基化和染色質構象變化等。以往有研究發現cccDNA的清除受表觀遺傳學調控，如組蛋白的乙酰化和甲基化，作者曾首次發現組蛋白的琥珀?；部蓞⑴ccccDNA的清除。

該研究首先通過HBV小鼠模型和表達HBV的肝細胞系證實cccDNA微染色體上有組蛋白H3K79琥珀?；揎棧l現HBV感染的小鼠模型的肝臟中，組蛋白H3K79琥珀?；乃斤@著升高，提示組蛋白H3K79的琥珀酰化可能有助于cccDNA轉錄。且細胞中琥珀酰轉移酶（GCN5）的敲低結果顯示GCN5與cccDNA的結合和H3K79琥珀酰化的水平均降低，并同時降低了cccDNA的轉錄活性，過表達GCN5后的結果則相反。GCN5突變（Y645A）增加了GCN5與cccDNA的結合，但未能影響cccDNA上H3K79琥珀?；胶图毎衏ccDNA的轉錄活性，提示GCN5可能可通過調節cccDNA上H3K79琥珀?；瞧渌鞍追g后修飾來調節cccDNA轉錄。

siGCN5的構建降低了肝細胞中HBVDNA、HBsAg、HBeAg、cccDNA和pgRNA水平，而肝癌組織周邊的HBVcccDNA陽性組織樣本中GCN5的表達水平顯著升高，且HBV感染的小鼠模型的肝組織中GCN5水平升高，證實GCN5有助于肝臟組織中HBV的復制。

cccDNA—免疫共沉淀（ChIP）試驗證實，IFNα可降低HBV感染的肝細胞中cccDNA微型染色體上組蛋白H3和H4的乙酰化水平。進一步研究顯示IFNα可抑制細胞中HBVcccDNA微型染色體的琥珀?；?。得出結論，IFNα可抑制HBVcccDNA微染色體上組蛋白的琥珀?；?。

WesternBlotting和ChIP分析表明，IFNα可降低HBVcccDNA微型染色體上組蛋白H3K79的琥珀?；揭约?a href="http://www.138165.com/e/tags/?tagname=HBV" target="_blank">HBV感染的體外肝細胞中cccDNA的水平。在肝細胞體外試驗中，GCN5的敲低或過表達或GCN5突變體（Y645A）的異位過表達下，IFNα會顯著影響肝細胞中HBVcccDNA，HBVDNA，HBsAg和HBeAg的水平。提示IFNα抑制了由GCN5介導的HBVcccDNA微染色體上的組蛋白H3K79的琥珀?；?。

該研究總結了IFNα在表觀遺傳上調控cccDNA清除的模型。該模型中組蛋白H3K79琥珀?；商嵘?a href="http://www.138165.com/e/tags/?tagname=HBV" target="_blank">HBV復制能力。而GCN5可介導HBVcccDNA微型染色體上的組蛋白H3K79琥珀?；?。同時IFNα可通過抑制組蛋白H3K79琥珀酰化途徑來抑制cccDNA的轉錄從而降低HBV復制能力。

肝霖君有話說

慢性HBV感染仍然是全球重要的公共衛生問題，也是引起肝癌發生的關鍵危險因素，cccDNA的存在是HBV在肝細胞中難以清除的原因?，F階段通過基于PEGIFNα的治療策略可大大增加慢乙肝的臨床治愈率，但完全治愈（cccDNA的清除）仍然認為是無法達到的。但近期有越來越多的研究開始探討IFNα在清除cccDNA方面的機制，似乎也為完全治愈提供了一些線索，有利于更加深入的研究和探索。

參考文獻：

YuanY,YuanH,YangG,etal.IFN-alphaconfersepigeneticregulationofHBVcccDNAminichromosomebymodulatingGCN5-mediatedsuccinylationofhistoneH3K79toclearHBVcccDNA[J].ClinEpigenetics,2020,12(1):135.