HepDART 2019：將HBV RNaseH 作為慢乙肝藥物靶標

現有的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染治療可控制病毒血癥并部分抑制疾病進展，但不能治愈。病毒共價閉合環狀DNA（cccDNA）是HBV的轉錄模板。cccDNA 具有非同尋常的穩定性，這就意味著徹底抑制HBV DNA復制就需要徹底清除 cccDNA ，而這是目前治療所無法實現的。

HBV核糖核酸酶H（RNaseH）對于病毒復制至關重要，因為在將其復制到DNA中后需要降解前基因組RNA。 通過抑制 RNaseH 正極DNA鏈的合成可阻止功能性HBV基因組的形成。為了改善病毒抑制效果并作為未來治療方法的一部分，圣路易斯大學等研究機構研究人員探索 RNaseH 作為有吸引力但未開發的藥物靶標。

重組HBV RNaseH在大腸桿菌中產生，并通過鎳親和層析純化。酶分析使用淬滅熒光RNA oligo：DNA雜合體，其中通過裂解RNA鏈可消除淬滅。測試化合物是由藥物化學合作者網絡合成的。

病毒復制抑制是在細胞培養中使用鏈優先定量PCR測定法測量的，該測定可檢測對病毒正-極性DNA鏈的抑制。細胞毒性通過MTS和其他測定法進行測量。通過對一系列微生物和脫靶酶進行反篩選可確保化合物的選擇性。 協同研究使用Chou-Talalay方法進行。 體內功效研究采用了HBV感染的FRG嵌合小鼠。

研究人員鑒定了超過150種對細胞培養中的病毒復制有活性的HBV RNaseH抑制劑，這些抑制劑主要來自于α-羥基麥芽酮（αHT），N-羥基吡啶二酮（HPD）和N-羥基萘啶酮（HNO）。最好的化合物對病毒復制的EC50 <0.2μM，培養液中的治療指數> 250。 SAR分析表明，這些抑制劑似乎通過協調RNaseH活性位點Mg ++離子起作用。

藥代動力學分析表明該化合物為混合模型抑制劑，會干擾底物結合和催化。該抑制劑對HBV的選擇性優于其他病毒，真菌和細菌病原體，并抗人類和大腸桿菌RNaseH。該抑制劑與拉米夫定具有協同作用，與衣殼抑制劑Hap12具有協同作用。 兩種化合物均能顯著抑制FRG小鼠體內的病毒復制，盡管觀察到毒性，因為兩種化合物均為未經過優化的初篩結果。

綜上，研究認為HBV RNaseH 是未開發的藥物靶標，值得利用。對HPD和HNO兩種化學結構的醫學效用的先導研究正在進行中，αHTs 的優化也已開始。

信息來源：The HBV ribonuclease H as a drug target