HepDART 2019：HBV抗病毒治療可導(dǎo)致cccDNA轉(zhuǎn)錄調(diào)控

隨著旨在實現(xiàn)HBV治愈新療法的不斷研究發(fā)展，量化控制或清除HBV感染肝細(xì)胞的負(fù)擔(dān)至關(guān)重要。先前的研究數(shù)據(jù)表明，抗病毒治療期間cccDNA的轉(zhuǎn)錄受到調(diào)控，約翰·霍普金斯大學(xué)研究人員在一項縱向研究中直接檢驗了這一假設(shè)。

研究招募了5名來自乙型肝炎研究網(wǎng)絡(luò)的HIV-HBV合并感染者作為受試者，他們的肝活檢配對時間相差約4年。使用單細(xì)胞激光捕獲顯微切割術(shù)（scLCM），研究人員從每次肝活檢中分離出數(shù)百個單肝細(xì)胞，并分別提取RNA和DNA。 研究使用液滴數(shù)字PCR（ddPCR）來定量每個肝細(xì)胞中的cccDNA，基因組前RNA（pgRNA）和總HBV DNA。

在這五名受試者中，三名受試者在第一次活檢時并未接受抗HBV治療，但此后不久就開始抗病毒治療。在第二次活檢時，他們的血漿HBV DNA下降> 6 log IU / ml。在兩次活檢時，1/5名受試者間斷地依賴于抗病毒藥物抑制病毒復(fù)制治療，兩次活檢之間 HBV DNA下降約1 log IU / ml（10 ^ 4至10 ^ 3 IU / ml）。第五位患者在兩次活檢時均接受抗HBV治療，兩次活檢中均未檢測到HBV DNA。

在第一次活檢時感染還不受控制的三名個體中，> 90％的肝細(xì)胞被感染，并在治療后下降至?30％，這一比例與先前對> 7年治療個體的數(shù)據(jù)一致。在個體HBV病毒形式中，三位個體在活檢之間pgRNA的下降值最大，平均水平范圍從第一次活檢的53-1254 cp /cell到第二次活檢的0.2-36.9 cp /cell。

在第一次活檢時，這三個個體的感染細(xì)胞中cccDNA的平均水平在3.4-3.5 cp /細(xì)胞之間，第二次活檢時在2.8-3.4 cp /cell之間。轉(zhuǎn)錄沉默的肝細(xì)胞定義為cccDNA +和pgRNA陰性，這三名受試者從活檢1增加到活檢2。

在兩次活檢之間仍然無法檢測到的人中，在兩次活檢之間轉(zhuǎn)錄沉默細(xì)胞的數(shù)量從1.6％增加到7.8％，最大pgRNA從78.4減少到18.7，而pgRNA陽性的細(xì)胞比例相對穩(wěn)定（分別為15.5％和 14.4％）。

在一個下降1 log IU / ml的個體中，兩個時間點均有超過90％的肝細(xì)胞感染，所有病毒形式的水平均保持恒定，并且在兩次活檢中均沒有轉(zhuǎn)錄沉默細(xì)胞。

總之，大多數(shù)肝細(xì)胞是在不受控制的HBV感染期間感染的，經(jīng)過多年的核苷（酸）類似物治療后，可將其降至約30％的水平。通過治療，HBV viroscape是動態(tài)的，并且HBV核酸的數(shù)量減少。

但是，該項研究證實，即使無法檢測到HBV DNA，也有相當(dāng)一部分被HBV感染的肝細(xì)胞是轉(zhuǎn)錄沉默的，并且通常隨著治療時間的延長而增加。

這些發(fā)現(xiàn)表明，HBV的抗病毒治療導(dǎo)致cccDNA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。 因此，需要進(jìn)一步的工作來理解轉(zhuǎn)錄沉默的機(jī)制。此外，作用機(jī)理依賴于HBV轉(zhuǎn)錄的新興療法可能需要支持這些細(xì)胞中重新激活轉(zhuǎn)錄的策略。（更多肝病新藥研究信息敬請關(guān)注“肝臟時間”微信公眾號）！

信息來源HepDART 2019大會論文集：Single hepatocyte molecular analysis of HBV from paired biopsies in HIV-HBV coinfection